اكتسب مركب 1H-2,3,3a,8b-رباعي هيدرو سيكلوبنتا[b]بنزوفوران، المعروف أيضًا باسم روكاجلاميد (RocA)، شهرةً واسعةً بفضل إمكاناته كعامل علاجي نباتي في علاج السرطان. تدرس هذه الدراسة تأثيراته على خلايا سرطان الثدي، وتحديدًا خلايا سرطان الثدي الغدّي البشري MDA-MB-231. تم تقييم تأثير روكاجلاميد بشكل شامل من خلال سلسلة من الإجراءات التجريبية. تم تقييم حيوية الخلايا باستخدام اختبار MTT، والذي كشف عن انخفاض في حيوية الخلايا يعتمد على الجرعة والوقت، حيث خفضت جميع التركيزات الحيوية إلى حوالي 50% بعد 24 ساعة (p < 0.001)، ثم انخفضت أكثر إلى حوالي 25% بعد 48 ساعة (p < 0.001)، ووصلت في النهاية إلى حوالي 20% أو أقل بحلول 72 ساعة لجميع التركيزات (p < 0.001). بعد ذلك، تم فحص تحفيز الاستماتة الخلوية باستخدام صبغة Annexin V-FITC وتحليل التدفق الخلوي، مما أظهر زيادة في الاستماتة الخلوية المتأخرة من 0.6% في المجموعة الضابطة إلى 2.9% في الخلايا المعالجة (p < 0.05)، وزيادة في النخر من 7.2% إلى 11.7% (p < 0.005)، مما أدى إلى معدل موت إجمالي للخلايا بلغ حوالي 15% في الخلايا المعالجة مقارنةً بـ 7.9% في المجموعة الضابطة. وقد تم تقييم هجرة الخلايا باستخدام اختبار التئام الجروح، والذي كشف عن تثبيط كبير في التئام الجروح، حيث أظهرت الخلايا المعالجة التئامًا بنسبة 3.2% فقط مقارنةً بـ 12% في المجموعة الضابطة بعد 24 ساعة، و7.3% مقارنةً بـ 17.4% بعد 48 ساعة (p < 0.005). بالإضافة إلى ذلك، أظهر الفحص المورفولوجي تغيرات تدريجية، حيث اتخذت الخلايا غير المعالجة أشكالًا مغزلية نموذجية، بينما أظهرت الخلايا المعالجة بـ RocA استدارة وانكماشًا وتفتتًا شديدًا عند التركيزات العالية (150-500 نانومتر). وأشار تحليل دورة الخلية باستخدام صبغة بروبيديوم يوديد (PI) إلى تغيرات في توزيع الأطوار، حيث انخفضت نسبة الخلايا في طور G1 من 55% في المجموعة الضابطة إلى 46% في الخلايا المعالجة، بينما زادت نسبة الخلايا في طوري S وM مجتمعين من 38% إلى 44%، مما يشير إلى ضعف التكاثر. علاوة على ذلك، أظهرت مستويات التعبير البروتيني المقاسة باستخدام مصفوفة Human XL Oncology Array انخفاضًا في VEGFA (-39%) وAXL (-13%) وPAI-1 (-34%)، إلى جانب ارتفاع في SNAIL1 (+295%) وEndoglin (+116.5%)، مما يدل على تعديل مسارات تكوين الأوعية الدموية وتطور الورم. تُظهر النتائج أن RocA يمتلك آليات متعددة مضادة للسرطان في خلايا سرطان الثدي الثلاثي السلبي، مما يؤكد إمكانية الانتقال به إلى دراسات ما قبل السريرية.